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请教自噬抑制剂加入时间 及作用时间

发布时间:2019-09-09

  然后我想验证该自噬的作用,看文献说 先用自噬抑制剂如3-MA处理1小时,然后再加化疗药物进行处理,观察抑制自噬后的凋亡情况,

  那么问题来了,请问提前1小时加入3-MA后,当1小时时间到后,我需要重新更换培养基,把含3MA的培养基换成正常培养基再加入化疗药物,还是直接在含有3-MA的培养基内直接加入3-MA 呢?

  我也是做LC3做了好久才做出来,幸运飞艇历史开奖记录。我用的是Abcam的LC3B,14,16KD,12%的胶,电泳先80V25分钟,接着100V跑1小时40分钟,基本把10KD的MARKER 跑出去看到17KD的MARKER到了接近玻璃板边缘1.5cm左右的地方就停止,转膜是湿转,PVDF膜,0.22的孔径,150mA,1小时,LC3-2和1分的很开,有时候是电泳时间不够LC3-1和2没分开。如果怎么调整实验方法都做不出来,加个阳性对照,最简单的弄只小鼠直接饿死,提点心脏肌肉组织做阳性对照,因为有时候做不出来是抗体的原因,之前买的优宁维的CST的LC3抗体,死活做不出来,换了Abcam的就好了!我摸了半年条件才做出来啊!希望对你们有帮助